本發(fā)明涉及醫(yī)用材料，具體涉及一種用于填充的絲素蛋白透明質(zhì)酸凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
1、醫(yī)美分為手術(shù)類(lèi)和非手術(shù)類(lèi)，非手術(shù)類(lèi)醫(yī)美，也稱(chēng)輕醫(yī)美，指用無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)醫(yī)學(xué)療法滿足求美訴求。與手術(shù)類(lèi)醫(yī)美相比，輕醫(yī)美因操作簡(jiǎn)單、創(chuàng)傷小、安全性高、恢復(fù)期短等優(yōu)點(diǎn)，成為醫(yī)美市場(chǎng)主要增長(zhǎng)點(diǎn)。
2、然而，目前上市的用于輕醫(yī)美的填充材料存在易于誘發(fā)炎癥等不良反應(yīng)、以及由于填充材料降解速率與細(xì)胞長(zhǎng)入速率不匹配而導(dǎo)致的在填充材料快速降解后遺留的空間無(wú)法有效彌補(bǔ)的缺陷。因此，市場(chǎng)上亟需安全有效且可無(wú)副作用的醫(yī)美填充產(chǎn)品。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是提供一種用于填充的絲素蛋白透明質(zhì)酸凝膠及其制備方法，該凝膠具有即時(shí)填充效果與促進(jìn)膠原蛋白再生雙重功能，適用于面部注射填充，生物相容性好。
2、本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
3、在一方面，本發(fā)明提供了一種用于填充的組合物，其特征在于，所述組合物包含凝膠顆粒和水性介質(zhì)；其中，所述凝膠顆粒包含絲素蛋白、透明質(zhì)酸或其鹽和交聯(lián)劑，且所述凝膠顆粒包含多孔三維體。
4、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠顆粒通過(guò)將所述多孔三維體加入包含透明質(zhì)酸或其鹽、絲素蛋白和交聯(lián)劑的溶液中制成。
5、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多孔三維體選自多孔微球、中空導(dǎo)管、多孔微粒、多孔不規(guī)則塊狀物中的一種或多種；優(yōu)選為多孔微球；更優(yōu)選為絲素蛋白多孔微球；還更優(yōu)選為被透明質(zhì)酸或其鹽浸潤(rùn)的絲素蛋白多孔微球；優(yōu)選地，所述多孔三維體粒徑小于600mm，更優(yōu)選小于250mm，還更優(yōu)選小于180mm，最優(yōu)選小于120mm。
6、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠顆粒中絲素蛋白：透明質(zhì)酸或其鹽：交聯(lián)劑的質(zhì)量比為(0.1-10):(1-20):1，優(yōu)選(1-5):(5-15):1，更優(yōu)選為(1-5):10:1，最優(yōu)選為2:10:1。
7、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠顆粒與所述水性介質(zhì)的質(zhì)量比為(0.1～10):1，優(yōu)選為1:1。
8、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)為透明質(zhì)酸或其鹽的溶液，優(yōu)選地，所述水性介質(zhì)中的透明質(zhì)酸或其鹽的濃度為2wt％-8wt％，優(yōu)選為5wt％。
9、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述透明質(zhì)酸或其鹽的分子量為200-4000kda，優(yōu)選400-1600kda，更優(yōu)選800-2000kda。
10、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述絲素蛋白的分子量為2-500kda，優(yōu)選10-250kda，更優(yōu)選50-100kda。
11、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠顆粒的彈性模量為300-800pa，優(yōu)選400-700pa。
12、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠顆粒的粘性模量為100-250pa，優(yōu)選150-250pa。
13、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述凝膠顆粒的推擠力為10-25n，優(yōu)選15-25n。
14、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述透明質(zhì)酸的鹽選自透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鋅、透明質(zhì)酸鉀中的一種，優(yōu)選為透明質(zhì)酸鈉。
15、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述交聯(lián)劑選自1,4-雙縮水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜(dvs)、1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)、聚乙二醇二縮水甘油醚(pegde)、uv光、戊二醛、1,2-雙(2,3-環(huán)氧丙氧基)乙烯(egdge)、1,2,7,8-二環(huán)氧辛烷(deo)、雙碳二亞胺(bcdi)、季戊四醇四縮水甘油醚(petge)、己二酰肼(adh)、雙(磺基琥珀酰亞胺基)辛二酸酯(bs)、六亞甲基二胺(hmda)、1-(2,3-環(huán)氧丙基)-2,3-環(huán)氧環(huán)己烷、碳二亞胺中的一種或其任意組合，優(yōu)選為bdde。
16、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，基于所述凝膠顆粒的總質(zhì)量，所述凝膠顆粒中多孔三維體的含量為0.01wt％-50wt％，優(yōu)選0.1wt％-20wt％，更優(yōu)選0.1wt％-10wt％，更優(yōu)選0.2wt％-5wt％，最優(yōu)選0.2wt％。
17、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多孔三維體通過(guò)冷凍干燥法制備，優(yōu)選通過(guò)對(duì)絲素蛋白水溶液進(jìn)行冷凍干燥而制備，更優(yōu)選采用如下方法制備：配制絲素蛋白濃縮液，然后將該濃縮液冷凍干燥，將得到的絲素蛋白凍干塊在37℃經(jīng)有機(jī)溶劑熏蒸一段時(shí)間，粉碎后過(guò)120目篩，優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇中的一種或多種。
18、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將所述多孔三維體加入透明質(zhì)酸或其鹽的溶液中以獲得透明質(zhì)酸浸潤(rùn)的多孔三維體；優(yōu)選地，將所述多孔三維體與透明質(zhì)酸或其鹽的混合液置于油相中以獲得透明質(zhì)酸浸潤(rùn)的多孔三維體；還更優(yōu)選地，所述透明質(zhì)酸浸潤(rùn)交聯(lián)的多孔三維體按照如下方法制備：
19、a.配制含bdde的堿溶液備用；
20、b.稱(chēng)取適量的透明質(zhì)酸鈉和絲素蛋白多孔微球，加入含bdde的堿溶液，攪拌均勻，真空脫氣，然后混合液緩慢滴入油相中，置于-20℃反應(yīng)3天；
21、c.取出置于室溫，調(diào)節(jié)ph值至中性，放入磷酸鹽緩沖液中透析；
22、優(yōu)選地，所述油相選自大豆油、液體石蠟、甘油、硅油等中的一種；
23、優(yōu)選地，所述混合液與油相的體積比為1：(1-20)。
24、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物為溶液、凝膠、凍干粉末、乳液或乳膏，優(yōu)選地，所述組合物為可注射的填充物。
25、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物用于填充至面部、頸部或軀干部位，優(yōu)選用于填充至面部。
26、在第二方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包含前述定義的凝膠顆粒和水性介質(zhì)。
27、在第三方面，本發(fā)明提供了前述組合物或試劑盒在制備用于改善有需要的受試者的皮膚狀況的產(chǎn)品中的用途，優(yōu)選地，所述皮膚狀況選自皮膚脫水、皮膚缺乏彈性、皮膚粗糙、皮膚缺乏緊繃感、皮膚拉伸線、皮膚拉伸紋、皮膚蒼白、真皮凹痕、臉頰凹陷、薄唇、眼眶后缺損、面部皺褶和皺紋。
28、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物被施用到受試者的真皮區(qū)域中。
29、在第四方面，本發(fā)明提供了一種改善有需要的受試者的皮膚狀況的非治療性方法，包括向所述受試者施用前述組合物或試劑盒；優(yōu)選地，所述皮膚狀況選自皮膚脫水、皮膚缺乏彈性、皮膚粗糙、皮膚缺乏緊繃感、皮膚拉伸線、皮膚拉伸紋、皮膚蒼白、真皮凹痕、臉頰凹陷、薄唇、眼眶后缺損、面部皺褶和皺紋。
30、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物被施用于受試者的面部；優(yōu)選地，所述組合物被施用到受試者的真皮區(qū)域中。
31、在第五方面，本發(fā)明提供了前述組合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
32、1)將透明質(zhì)酸或其鹽的溶液、絲素蛋白、交聯(lián)劑與多孔三維體混合后靜置并過(guò)篩，得到凝膠顆粒；優(yōu)選地，所述多孔三維體選自多孔微球、中空導(dǎo)管、多孔微粒、多孔不規(guī)則塊狀物中的一種或多種；優(yōu)選為多孔微球；更優(yōu)選為絲素蛋白多孔微球；還更優(yōu)選為被透明質(zhì)酸或其鹽浸潤(rùn)的絲素蛋白多孔微球；優(yōu)選地，所述多孔三維體粒徑小于600mm，更優(yōu)選小于250mm，還更優(yōu)選小于180mm，最優(yōu)選小于120mm；
33、2)將步驟1)所得的凝膠顆粒加入水性介質(zhì)中。
34、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多孔三維體通過(guò)冷凍干燥法制備，優(yōu)選通過(guò)對(duì)絲素蛋白水溶液進(jìn)行冷凍干燥而制備，更優(yōu)選采用如下方法制備：配制絲素蛋白濃縮液，然后將該濃縮液冷凍干燥，將得到的絲素蛋白凍干塊在37℃經(jīng)有機(jī)溶劑熏蒸一段時(shí)間，粉碎后過(guò)120目篩，優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇中的一種或多種。
35、在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將所述多孔三維體加入透明質(zhì)酸或其鹽的溶液中以獲得透明質(zhì)酸浸潤(rùn)的多孔三維體；優(yōu)選地，將所述多孔三維體與透明質(zhì)酸或其鹽的混合液置于油相中以獲得透明質(zhì)酸浸潤(rùn)的多孔三維體；還更優(yōu)選地，所述透明質(zhì)酸浸潤(rùn)交聯(lián)的多孔三維體按照如下方法制備：
36、a.配制含bdde的堿溶液備用；
37、b.稱(chēng)取適量的透明質(zhì)酸鈉和絲素蛋白多孔微球，加入含bdde的堿溶液，攪拌均勻，真空脫氣，然后混合液緩慢滴入油相中，置于-20℃反應(yīng)3天；
38、c.取出置于室溫，調(diào)節(jié)ph值至中性，放入磷酸鹽緩沖液中透析；
39、優(yōu)選地，所述油相選自大豆油、液體石蠟、甘油、硅油等中的一種；
40、優(yōu)選地，所述混合液與油相的體積比為1：(1-20)。
41、在第六方面，本發(fā)明提供了前述組合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
42、1)分別配制透明質(zhì)酸鹽溶液和含bdde的堿溶液備用；
43、2)稱(chēng)取適量的原料溶于含bdde的堿溶液中，攪拌均勻，置于0-10℃靜置10-72h，優(yōu)選為在4℃靜置48h；然后置于10-60℃加深交聯(lián)1-10h，優(yōu)選為40℃加深交聯(lián)3h，得到共交聯(lián)凝膠；
44、3)將上述共交聯(lián)凝膠置于磷酸鹽緩沖液中透析一段時(shí)間，然后過(guò)60-80目篩制粒，得到凝膠顆粒；
45、4)在上述凝膠顆粒中加入適量透明質(zhì)酸鹽溶液，濕熱滅菌，即得。
46、步驟2)所述原料為透明質(zhì)酸或其鹽和絲素蛋白；或透明質(zhì)酸或其鹽、絲素蛋白和絲素蛋白多孔微球，或透明質(zhì)酸或其鹽、絲素蛋白和透明質(zhì)酸浸潤(rùn)交聯(lián)的絲素蛋白多孔微球。
47、有益效果
48、與單一透明質(zhì)酸凝膠相比，本發(fā)明提供的凝膠含有絲素蛋白和透明質(zhì)酸兩種填充材料，生物相容性良好、免疫原性低，避免了化學(xué)性填充方式引起亞臨床炎癥反應(yīng)和纖維增生等不良反應(yīng)，本發(fā)明制備的凝膠力學(xué)性能良好，皮膚內(nèi)注射后，可支撐軟組織中凹陷，使面部飽滿圓潤(rùn)，可注射性良好，可促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，填充后細(xì)胞黏附效果好，可促進(jìn)皮膚膠原蛋白再生，促進(jìn)皮膚組織再生，具有即時(shí)填充和長(zhǎng)期組織修復(fù)的作用。
49、本發(fā)明絲素蛋白微球?yàn)槎嗫缀＞d狀支架材料，支撐性好，有利于細(xì)胞附著，促進(jìn)膠原蛋白再生，本發(fā)明將剛性多孔絲素蛋白微球骨架和柔性連續(xù)凝膠基質(zhì)相結(jié)合，具有程序式梯度降解和刺激組織響應(yīng)再生效應(yīng)，減緩了填充材料的降解速度，延長(zhǎng)其在面部軟組織修補(bǔ)、填充的作用時(shí)間，提高了材料的有效性，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期填充效果。同時(shí)避免了plla等市售微球材料注射后刺激過(guò)度產(chǎn)生肉芽腫等面部不良反應(yīng)，安全性良好，本發(fā)明作為填充劑具有逆齡抗衰的功效。