本發明屬于表觀遺傳學領域，更具體地，本發明涉及一種用于多癌種鑒定的新型靶核酸分子p7及其用途。
背景技術：
1、癌癥早期篩查方法通常包括血液檢測、影像學檢查和分子生物學檢測等。這些方法通過尋找癌癥早期的生物標志物或可疑病變進行篩查。常見的篩查方法包括：1.血液檢測：這類方法包括液體活檢、循環腫瘤dna(ctdna)、腫瘤相關抗原(如ca-125,?psa等)的檢測。液體活檢是一項創新技術，通過血液樣本分析癌癥相關的dna、rna、蛋白質或其它分子標志物，幫助早期識別癌癥。2.影像學檢查：如x光、ct掃描、mri、超聲、內窺鏡等，用于檢測異常的腫瘤或病變。例如，乳腺癌篩查常用的乳腺x光檢查(乳腺鉬靶)或超聲，肺癌篩查常用低劑量ct掃描。3.分子生物學檢測：包括基因組學和轉錄組學技術，通過基因突變、表觀遺傳學改變等來識別癌癥標志物，早期預測癌癥風險。
2、表觀遺傳學指的是不改變dna序列，但通過化學修飾(如dna甲基化、組蛋白修飾等)來調節基因的表達或抑制。主要的表觀遺傳機制包括：?dna甲基化：dna分子上的胞嘧啶(c)被甲基修飾，通常發生在cpg島上。這種甲基化可以抑制基因的表達，尤其是在啟動子區域的甲基化。組蛋白修飾：組蛋白是dna的包裝蛋白，組蛋白的乙酰化、甲基化、磷酸化等修飾可以改變染色質的結構，影響基因的開放或閉合狀態，從而調控基因的表達。非編碼rna：如microrna和長鏈非編碼rna(lncrna)在調節基因表達方面發揮作用。它們可以通過調節mrna的穩定性或翻譯過程來控制基因的表達。
3、癌癥與表觀遺傳的關系是當前腫瘤生物學研究中的一個重要領域。癌癥是一種由細胞基因組中的突變或基因表達異常引起的疾病，而表觀遺傳學則研究基因表達如何受到環境和外部因素影響，且不改變dna序列本身。近年來，研究者們發現，癌癥的發生和發展不僅僅與基因突變有關，表觀遺傳變化(如dna甲基化、組蛋白修飾、非編碼rna的作用等)在癌癥的發生和進展中起著至關重要的作用。
4、dna甲基化模式的異常為癌癥的早期診斷、預后評估以及治療選擇提供了有價值的信息。因此，研究人員開始探索利用dna甲基化作為生物標志物來預測癌癥。液體活檢(如血液、尿液或唾液等體液中的癌癥標志物檢測)是一種無創性的方法，用于檢測癌癥的存在和監測其進展。dna甲基化標志物因其在癌癥發生中具有普遍性和穩定性，成為液體活檢的理想選擇。研究發現，血液中的循環游離dna(cfdna)或外泌體dna可以反映癌癥細胞中的甲基化變化。?septin9基因的甲基化已被用于結直腸癌的早期篩查，并獲得了fda的批準。類似的研究正在探索如何通過檢測血液中的甲基化標記來早期診斷其它類型的癌癥，如肺癌、乳腺癌和胃癌等。
5、不同類型的癌癥通常會表現出特定的dna甲基化模式。因此，通過識別和分析不同癌癥的特征性甲基化標記，研究人員可以開發出高靈敏度的診斷工具。例如，某些甲基化標記可能只在某一類型癌癥中出現，這為癌癥的早期檢測提供了有效的依據。如乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌等，在各自的dna甲基化模式中有一些特定的標志基因。利用這些基因的甲基化信息，可以輔助進行癌癥的分類和診斷。
6、表觀遺傳學的研究為理解癌癥的發生和發展提供了新的視角，表觀遺傳改變不僅能在癌癥的早期階段起作用，而且還可能在癌癥的侵襲、轉移以及耐藥性等方面發揮重要作用。隨著表觀遺傳學和精準醫學的研究深入，相關的靶向治療和早期診斷方法有望在癌癥治療中發揮更大的作用。同時，表觀遺傳學也為癌癥的預防提供了新的方向。
技術實現思路
1、本發明的目的在于提供一種用于多癌種鑒定的新型靶核酸分子p7及其用途。
2、在發明的第一方面，提供特異性檢測靶核酸區段的cpg位點甲基化修飾水平的試劑在制備檢測腫瘤的試劑或試劑盒中的應用；所述靶核酸區段為人基因組中的特定區段，選自：(1)seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?idno:6或seq?id?no:7所示核苷酸序列的核酸或它們的組合；或(2)與(1)的核酸序列在序列上互補且長度相同的核酸或核酸組合。
3、在一個實施方案中，所述seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6或seq?id?no:7還包括其序列變體，或同源序列。
4、在一個較佳實施方案中，所述序列變體或同源序列為與所述seq?id?no:1、seq?idno:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6或seq?id?no:7所示序列相比，具有80%以上、85%以上、90%以上、92%以上、95%以上、96%以上、98%以上、99%以上、99.5%以上、99.8%以上序列同一性的序列。
5、在一個實施方案中，也包括由所述序列變體或同源序列轉變(非修飾的胞嘧啶轉變為t或u，而其修飾的cpg位點的胞嘧啶c不變)而來的多核苷酸。
6、在一個實施方案中，檢測的檢測腫瘤包括對腫瘤進行診斷、篩查、檢測或預后評估。
7、在一個實施方案中，所述的檢測腫瘤包括分析腫瘤的風險性。
8、所述檢測、篩查、診斷、檢測或預后評估包括早期腫瘤或癌前的檢測、篩查、診斷、檢測或預后評估，也包括對于正常人的檢測、篩查、診斷、檢測或預后評估。
9、在一個實施方案中，檢測時，若靶核酸區段的cpg位點甲基化修飾水平顯著提高，則預示具有高的腫瘤風險。
10、在一個實施方案中，檢測所述靶核酸區段的cpg位點甲基化修飾水平的方法包括：焦磷酸測序法、重亞硫酸鹽轉化測序法、甲基化芯片法、甲基化特異pcr、甲基化敏感限制性內切酶酶切法、qpcr法、數字pcr法、二代測序法、三代測序法、全基因組甲基化測序法、dna富集檢測法、簡化亞硫酸氫鹽測序法、hplc法、massarray，或它們的組合。
11、在一個實施方案中，其它其他甲基化檢測方法及未來新開發的甲基化檢測方法也可被應用于本發明中。
12、在一個實施方案中，所述甲基化敏感限制性內切酶為對其識別位點含有甲基化堿基敏感的限制性內切酶；包括但不限于：hpaii、acii、bsu15i、hin1i、hin6i、hpych4iv、nari等其中1種或多種的組合。
13、在一個實施方案中，檢測所述靶核酸區段的cpg位點甲基化修飾水平的方法包括：
14、(1)?提取待測樣品的核酸；
15、(2)?對所提取的核酸進行處理，使其中未發生修飾的胞嘧啶轉化為尿嘧啶(其非修飾的胞嘧啶(c)轉變為t或u，而其修飾的cpg位點的胞嘧啶不變)；較佳地，利用重亞硫酸鹽處理步驟(1)所述的核酸；
16、(3)?分析(2)的核酸中對應于靶核酸區段的序列區段，獲得cpg位點甲基化修飾水平。
17、在一個實施方案中，所述腫瘤為泛癌(pan-cancer)，包括：實體瘤，非實體瘤；較佳地，所述腫瘤包括：腦膠質瘤，卵巢癌，喉癌，宮頸癌，胃癌，結直腸癌，前列腺癌，骨肉瘤，肺癌，膽道腫瘤，鼻咽癌，淋巴癌，乳腺癌，白血病，黑色素瘤，口腔癌，食管癌，肝癌，子宮內膜癌，腎細胞癌，甲狀腺癌，胰腺癌，尿路上皮癌，脂肪肉瘤，膀胱癌。
18、在一個實施方案中，所述靶核酸區段為seq?id?no:3(p7-3)和seq?id?no:1(p7-1)所示核苷酸序列的核酸的組合。
19、在一個實施方案中，所述試劑或試劑盒針對的樣本包括(但不限于)：組織樣本(如石蠟包埋樣本)、血液樣本、細胞樣本(如細胞涂片樣本)、尿液樣本、胸腔積液樣本、肺泡灌洗液樣本、腹水樣本、腹水灌洗液樣本、膽汁樣本、糞便樣本、唾液樣本、腦脊液樣本、宮頸樣本、宮腔樣本。
20、在本發明的另一方面，提供靶核酸區段或由其轉變而來的核酸區段在制備腫瘤檢測(包括篩查、診斷、檢測或預后評估)的試劑或試劑盒中的應用；其中，所述靶核酸區段為人基因組中的特定區段，選自：(1)seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6或seq?id?no:7所示核苷酸序列的核酸或它們的組合；或(2)與(1)的核酸序列在序列上互補且長度相同的核酸或核酸組合；由所述靶核酸區段轉變而來的核酸區段為對應于(1)或(2)的多核苷酸，其非修飾的胞嘧啶(c)轉變為t或u，而其修飾的cpg位點的胞嘧啶不變。
21、在本發明的另一方面，提供一種制備用于檢測(包括篩查、診斷、檢測或預后評估)腫瘤的試劑的方法，該方法包括：(a)提供靶核酸區段，所述靶核酸區段選自：(1)seq?idno:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6或seq?id?no:7所示核苷酸序列的核酸或它們的組合；或(2)與(1)的核酸序列在序列上互補且長度相同的核酸或核酸組合；(b)針對(a)所述靶核酸區段，制備特異性檢測該靶序列的cpg位點甲基化修飾水平的檢測試劑。
22、在一個實施方案中，所述的檢測試劑包括(但不限于)：引物，探針；較佳地，所述的檢測試劑包括：
23、seq?id?no:?15和seq?id?no:?16所示核苷酸序列的引物；
24、seq?id?no:?17和seq?id?no:?18所示核苷酸序列的引物；
25、seq?id?no:?19和seq?id?no:?20所示核苷酸序列的引物；
26、seq?id?no:?21和seq?id?no:?22所示核苷酸序列的引物；
27、seq?id?no:?23和seq?id?no:?24所示核苷酸序列的引物；
28、seq?id?no:?25和seq?id?no:?26所示核苷酸序列的引物；和/或，
29、seq?id?no:?27和seq?id?no:?28所示核苷酸序列的引物。
30、較佳地，所述試劑同時包括seq?id?no:?15和seq?id?no:?16，seq?id?no:?19和seq?id?no:?20所示核苷酸序列的引物。
31、在一個實施方案中，對于所述靶核酸區段，可以制備一組或多組試劑。
32、在一個實施方案中，所述的檢測試劑被整合于芯片或試紙上。
33、在本發明的另一方面，提供用于檢測腫瘤的試劑，其特異性檢測靶核酸區段的cpg位點甲基化修飾水平，所述靶核酸區段選自：(1)seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6或seq?id?no:7所示核苷酸序列的核酸或它們的組合；或(2)與(1)的核酸序列在序列上互補且長度相同的核酸或核酸組合。
34、在一個實施方案中，所述試劑包括選自下組的引物：
35、seq?id?no:?15和seq?id?no:?16所示核苷酸序列的引物；
36、seq?id?no:?17和seq?id?no:?18所示核苷酸序列的引物；
37、seq?id?no:?19和seq?id?no:?20所示核苷酸序列的引物；
38、seq?id?no:?21和seq?id?no:?22所示核苷酸序列的引物；
39、seq?id?no:?23和seq?id?no:?24所示核苷酸序列的引物；
40、seq?id?no:?25和seq?id?no:?26所示核苷酸序列的引物；和/或，
41、seq?id?no:?27和seq?id?no:?28所示核苷酸序列的引物。
42、在一個實施方案中，所述試劑同時包括seq?id?no:?15和seq?id?no:?16，seq?idno:?19和seq?id?no:?20所示核苷酸序列的引物。
43、在本發明的另一方面，提供一種用于進行腫瘤檢測(包括篩查、診斷、檢測或預后評估)的試劑盒，所述試劑盒中包括所述的試劑或試劑組合。
44、在一個實施方案中，所述試劑盒中還可包括但不限于：dna純化試劑，dna提取試劑，重亞硫酸鹽，pcr擴增試劑。
45、在一個實施方案中，所述的試劑盒中還包括：用于標明檢測操作步驟和結果判定標準的說明書。
46、在本發明的另一方面，提供分離的核酸或其轉變而來的核酸，所述的核酸為：(1)seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6或seqid?no:7所示核苷酸序列的核酸或核酸組合；或(2)與(1)的核酸在序列上互補的核酸或核酸組合；其中，所述由核酸轉變而來的核酸為對應于(1)或(2)的核酸，其非修飾的胞嘧啶轉變為t或u，而其修飾的cpg位點的胞嘧啶c不變。
47、本發明的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。