本申請(qǐng)涉及生物，尤其涉及一種盧立康唑中間體前體還原酶突變體、基因、工程菌及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、盧立康唑，其中文化學(xué)名為4-(2,4-二氯苯基)-1,3-二硫戊環(huán)-2-叉-1-咪唑基乙腈，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式所示：
2、。
3、盧立康唑?yàn)榕R床常用的咪唑類局部抗真菌藥，其分子中通常存在一個(gè)或多個(gè)關(guān)鍵立體中心，這些立體中心的絕對(duì)構(gòu)型可能直接決定藥物的活性、選擇性與安全性。
4、目前，越來(lái)越多的藥物或者中間體可以通過(guò)生物催化的方式來(lái)合成的，盧立康唑中間體(s)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇是盧立康唑化學(xué)合成過(guò)程中一個(gè)重要的中間體。盧立康唑中間體(s)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇可以通過(guò)對(duì)2,2',4'-三氯苯乙酮進(jìn)行還原催化得到。
5、2,2',4'-三氯苯乙酮為前手性酮類化合物，盧立康唑中間體(s)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇為s型手性羥基化合物。背景技術(shù)中，盧立康唑中間體前體還原酶對(duì)盧立康唑中間體前體2,2',4'-三氯苯乙酮進(jìn)行不對(duì)稱還原氫化催化的立體選擇性及催化活性較低，不利于盧立康唑中間體(s)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇合成效率的提高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于以上問(wèn)題，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種盧立康唑中間體前體還原酶突變體、基因、工程菌及應(yīng)用，以解決上述不利于提高盧立康唑中間體合成效率的技術(shù)問(wèn)題。
2、第一方面，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種盧立康唑中間體前體還原酶突變體，其特征在于，所述盧立康唑中間體前體還原酶突變體的氨基酸序列如seq?id?no：5～seq?id?no：9所示。
3、第二方面，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種盧立康唑中間體前體還原酶突變體基因，所述盧立康唑中間體前體還原酶突變體基因編碼上述的盧立康唑中間體前體還原酶突變體。
4、第三方面，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種重組載體，所述重組載體包括上述的盧立康唑中間體前體還原酶突變體基因。
5、第四方面，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種重組工程菌，所述重組工程菌包括上述的重組載體。
6、第五方面，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種盧立康唑中間體的合成系統(tǒng)，所述盧立康唑中間體的合成系統(tǒng)包括重組工程菌和異丙醇，所述重組工程菌為上述的重組工程菌。
7、第六方面，本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種盧立康唑中間體的合成方法，在盧立康唑中間體前體的濃度為50?g/l～300?g/l的反應(yīng)體系中，以所述盧立康唑中間體前體為底物，加入上述的重組工程菌，40℃～50℃下，于ph為5.0～7.0的反應(yīng)體系中反應(yīng)，得到產(chǎn)物。
8、本申請(qǐng)實(shí)施例提供的盧立康唑中間體前體還原酶突變體、基因、工程菌及應(yīng)用，盧立康唑中間體前體還原酶突變體的氨基酸序列如seq?id?no：5～seq?id?no：9所示，其對(duì)盧立康唑中間體前體2,2',4'-三氯苯乙酮進(jìn)行不對(duì)稱還原催化的立體選擇性提高，得到高手性純度的s型的盧立康唑中間體(s)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇，有利于提高盧立康唑中間體(s)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇的合成效率。
9、本申請(qǐng)的這些方面或其他方面在以下實(shí)施例的描述中會(huì)更加簡(jiǎn)明易懂。
1.一種盧立康唑中間體前體還原酶突變體，其特征在于，所述盧立康唑中間體前體還原酶突變體的氨基酸序列如seq?id?no：5～seq?id?no：9所示。
2.一種盧立康唑中間體前體還原酶突變體基因，其特征在于，所述盧立康唑中間體前體還原酶突變體基因編碼如權(quán)利要求1所述的盧立康唑中間體前體還原酶突變體。
3.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包括如權(quán)利要求2所述的盧立康唑中間體前體還原酶突變體基因。
4.一種重組工程菌，其特征在于，所述重組工程菌包括如權(quán)利要求3所述的重組載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組工程菌，其特征在于，所述重組工程菌為大腸桿菌，所述大腸桿菌為e.?coli?bl21(de3)。
6.一種盧立康唑中間體的合成系統(tǒng)，其特征在于，所述盧立康唑中間體的合成系統(tǒng)包括重組工程菌和異丙醇，所述重組工程菌為如權(quán)利要求4所述的重組工程菌。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的盧立康唑中間體的合成系統(tǒng)，其特征在于，所述異丙醇與反應(yīng)體系的體積比為30%～60%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的盧立康唑中間體的合成系統(tǒng)，其特征在于，反應(yīng)體系中還包括pbs緩沖液，所述pbs緩沖液的ph值為5.0～7.0。
9.一種盧立康唑中間體的合成方法，其特征在于，在盧立康唑中間體前體的濃度為50g/l～300?g/l的反應(yīng)體系中，以所述盧立康唑中間體前體為底物，加入如權(quán)利要求4所述的重組工程菌，40℃～50℃下，于ph為5.0～7.0的反應(yīng)體系中反應(yīng)，得到產(chǎn)物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的盧立康唑中間體的合成方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系包括異丙醇，所述異丙醇與所述反應(yīng)體系的體積比為0.30～0.60:1。